英国365bet提现要多久

bte365app下载

检测Th1细胞和Th2细胞

作者:365bet线上网投 发布时间:2019-09-11 09:43 点击次数:

首先,检测试剂1。
PMA储备溶液:PMA在浓度为零的DMSO中溶解。
将工作溶液储存在-20℃,1mg / ml,在RPMI-1640或PBS中1:100稀释(灭菌,不含叠氮化钠)。此时,可以稀释1μg/ ml,使用浓度为25ng / ml,25μg/ ml的母液。
2
依诺霉素原液:溶解于DMSO中的浓度为1mg / ml的霉素,在~20℃下保存。工作液:用RPMI-1640或PBS稀释的母液1:20(无菌,不含叠氮化钠),此时50μg/ ml,工作浓度1μg/ ml,可稀释成溶液。保留20μg/ ml。
3
莫能菌素:储备溶液:将Menenster以50mg / ml的浓度溶解在甲醇中。对于促进的溶液,可将其置于40-43℃的水浴中。
在4°C下储存4个月使用溶液:在RPMI-1640或PBS(灭菌,无叠氮化钠)中1:50稀释,1mg / ml。工作集中度为1。
7μg/ ml(取17μl/ ml)。
4
RPMI 1640,RPMI 1640含有10%FCS(胎牛血清),2mmol / L谷氨酰胺,50μg/ ml青霉素,50μg/ ml链霉素和100μg/ ml新霉素。
抗体:细胞表面标志物抗体。CD3-PC5(PerCP),CD8-FITC。
细胞内因子:IL-4-PE,IFN-Y等。
阻挡剂:可从美国Caltag公司购买FixPerm断路器。EE FACS断路器BD公司。UU。,来自法国的Immunotech IntraPrep。
二,检测步骤1。
肝素抗凝和血液提取
2
将两个管用作阴性对照管(管A)和测量管(管B),并将100μl血液和100μlIPRM1-1640加入两个管中。
3
在管A上加3。
加入4μl/ ml Moengxing工作液,加入管B:5μl/ ml工作液PMA +4μl/150μg/ ml离子霉素工作液+3。
4ul 1 mg / ml Moengxing液压油。
4
在37℃,5%CO 2培养箱中孵育4至6小时。

充分混合,取出100 IU,加入适量的CD3-PC5(PerCP),CD8-FITC,孵育一段时间(见抗体说明书)。
6
固定断路器并关闭。
7
加入适量的IL-4-PE,IFN-γPE并孵育一段固定的时间(参见抗体手册)。
8
用PBS洗涤一次,除去上清液,将细胞沉淀重悬于适当体积的PBS中并用机器测试。
三,分析结果1。
通过将CD3置于门中来选择T淋巴细胞。
2
通过分别使用CD8和IFN-γ建立两个参数的直方图来分析第一步中鉴定的淋巴细胞。
3
获得CD8 / IFN-γ+(Th1)和CD8- / IL-4 +(Th2)细胞的百分比。


   


上一篇:氨基酸伪维胺片(II)   下一篇:没有了